名称：小鼠核因子kb受体活化因子配体(RANKL)ELISA试剂盒

规格：48T/96T

原理：ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的 催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术

包括：人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等等

标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

小鼠核因子kb受体活化因子配体(RANKL)ELISA试剂盒操作流程如下：

（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。　（2）酶标板置4℃，包被过夜。

（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。　

（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。　

（6）洗板，同（4）。　

（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。　

（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。　

（9）洗板，同（4）。　

（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。　

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。　

（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2， 终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

注：所用溶液配方

(1) PBS：称取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl，加双蒸水至1000ml。

（2）包被缓冲液：称取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3，加双蒸水至 1000m1。

（3）洗涤液(PBST)：含0.05% Tween-20的PBS。

（4）稀释液：含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS，主要用以稀释抗体、标准品、样品。

（5）TMB显色液：称取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g柠檬酸，加双蒸水至1O0ml，配成柠檬酸-磷suan缓冲溶液。用10.5 ml 柠檬酸-磷suan缓冲溶液溶解1锭TMB，再加入35μl 3% H2O2

（6）细胞裂解液：1% TritonX-100，137mmol/L NaCl，20mmol/L Tris-HCl，2mmol/L EDTA，1mmol/L PMSF，pH 7.4。（其中PMSF溶于异丙chun中，配成1O mmo/L，-20℃ 贮存备用。保存条件及有效期：

1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月

卡迈舒（上海）生物科技有限公司主营小鼠核因子kb受体活化因子配体(RANKL)ELISA试剂盒，产品服务于生物科研领域。致力为中国生命科学研究领域的科研工作者提供高品质产品，产品囊括细胞因子系列，内分泌系列，特种蛋白系列，肿瘤以及自身免疫系列等多个优势系列。产品种类齐全指标上千万种，原料均采用进口试剂，引进国外生产工艺，质量稳定可靠，性价比高，深受广大用户的信赖。