新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性*

产品参数

简要概述

        新型钙离子荧光探针Cal-520 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内，Cal520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte 染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM， Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的强大指标。

        除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。 此外，Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

产品说明书

使用Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯类

1.操作步骤

        Calbryte AM酯应在使用前在无水DMSO中重新配制。 DMSO储备溶液可以在-20℃下储存（干燥）并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定三个月。 以下是我们推荐的将Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的特定需求进行修改。

a）在无水DMSO中制备2至5mM Calbryte 520AM，Calbryte 590AM或Calbryte 630AM酯的储备溶液。

b）将Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。 在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。 细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯的水溶性。 各种Pluronic®F-127可从百萤购买。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）添加到染料工作溶液中（终浓度为0.5-1 mM）

注意：各种ReadiUse 丙磺舒（包括水溶性钠盐和稳定溶液）均可从百萤购买。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟，然后将板在室温下再孵育15分钟。

f）用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）对于Calbryte 520 AM，在Ex / Em = 490 / 525nm处进行钙测试，对于Calbryte 590 AM，使用540/590nm进行钙测试，对于Calbryte 630 AM，使用610/640nm进行钙测试。

2.测量细胞内钙响应：

图1. CHO-K1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。 将CHO-K1细胞以每孔100μL每孔40,000个细胞接种过夜，在96孔黑色壁/透明底板中。将含有丙磺舒的HHBS中的100μLFluo-4AM或Calbryte 520AM加入孔中，并将细胞在37℃下孵育45分钟。 用200μLHHBS替换染料加载培养基，加入50μL50μMATP，并使用FITC通道用荧光显微镜（Keyence）成像。

产品应用文献

An evolutionary-conserved VPS34-PIKfyve-TRPML1-Myosin II axis regulates the speed of amoeboid cell migration
Authors: Dehio, Philippe and Michard, C{\'e}line and Yam-Puc, Juan Carlos and Mart{\'\i} i L{\'\i}ndez, Adri{\`a}-Arnau and Fabre, Lucien and Schaefer, Thorsten and Wymann, Matthias P and Okkenhaug, Klaus and Soldati, Thierry and Mehling, Matthias and others,
Journal: bioRxiv (2024): 2024--01

Authors: Maltsev, Anna V and Barlas, Yasir and Hazan, Adina T and Zhang, Rui and Goldhaber, Joshua I
Journal: Biophysical Journal (2024): 457a

Universal Biomaterial-on-Chip: a versatile platform for evaluating cellular responses on diverse biomaterial substrates
Authors: Atif, Abdul Raouf and Aramesh, Morteza and Carter, Sarah-Sophia and Tenje, Maria and Mestres, Gemma
Journal: Journal of Materials Science: Materials in Medicine (2024): 2

Biphasic calcium phosphate recruits Tregs to promote bone regeneration
Authors: Li, Jiaojiao and Zhao, Qin and Wang, Can and Fu, Liangliang and Zhao, Zifan and Tang, Ziqiao and Yin, Chenghu and Wang, Min and Xia, Haibin and others,
Journal: Acta Biomaterialia (2024)