Cell Meter 磷脂酰丝氨酸细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 405nm激发

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简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来检测细胞凋亡。在细胞凋亡中，PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标，可以在观察形态变化之前进行检测。该试剂盒中使用的我们专有的Apopxin PS指示剂是基于小分子的PS指示剂。 PS指示剂与膜PS结合后具有蓝色荧光。试剂盒中使用的PS染料具有与PacificBlue®（PacificBlue®是Invitrogen的商标）相似的光谱特性。蓝色荧光染料在405nm处被紫色激发光充分激发，并在〜450 nm处发出强烈的蓝色荧光。该试剂盒经过优化，可与配备了紫色激发光的流式细胞仪一起使用。它特别适用于细胞的多色流式细胞术分析。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 磷脂酰丝氨酸细胞凋亡检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物制备细胞（200 µL /样品）

2. 添加Apopxin 紫色450分析溶液

3. 在室温下孵育30至60分钟

4. 使用带有450/40 nm滤光片（Pacific Blue通道）的流式细胞仪或带有紫色滤光片的荧光显微镜分析细胞

实验步骤

1.用Apopxin 紫色450准备和孵育细胞：

1.1用测试化合物处理细胞一段时间（对于用星形孢菌素处理过的Jurkat细胞，需要4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.2离心细胞以获得1-5×10⁵细胞/管。

1.3将细胞重悬于200 µL分析缓冲液（组分B）中。

1.4向细胞中加入2 µL Apopxin 紫色450（组分A）。

1.5可选：向坏死细胞中加入2 µL 100X碘化丙啶（组分C）。

1.6避光保存，于室温下孵育30至60分钟。

1.7在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，添加300 µL分析缓冲液（组分B）以增加体积。

1.8使用带有450/40 nm滤光片的流式细胞仪（Pacific Blue通道）或带有紫色滤光片的荧光显微镜检测荧光强度。

2.通过使用流式细胞仪进行分析：

2.1使用带有450/40 nm滤光片（Pacific Blue通道）的流式细胞仪定量Apopxin Violet 450结合物。 将碘化丙锭加入细胞后，使用610/20 nm滤光片（PE-Texas Red通道）测量细胞活力。 注意：由于对细胞的分离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤，因此不对贴壁细胞的Apopxin 结合流式细胞术进行常规测试。 

3.通过使用荧光显微镜进行分析：

3.1孵育后用移液管吸移细胞悬液，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后用测定缓冲液重悬细胞。

3.2将细胞添加到载玻片上。 注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。 与Apopxin Violet 450孵育后，用Assay Buffer冲洗1-2次，然后将Assay Buffer加到盖玻片上。 将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。 与Apopxin Violet 450孵育后，还可以将细胞固定在2％甲醛中，并在显微镜下观察。

3.3在带有紫色滤光片的荧光显微镜下，用Apopxin 紫色450分析凋亡细胞。 当碘化丙啶添加到细胞中时，使用TRITC滤波片检测细胞活力。 质膜上的蓝色染色表明Apopxin Violet 450与细胞表面的PS结合。