仑昌硕生物   小鼠干扰素诱导鸟苷酸结合蛋白1（GBP1）elisa试剂盒

               目的 构建载有小鼠抵抗素(resistin)基因及其反义核酸的重组真核表达质粒,为下一步进行resistin生物功能研究打基础.方法 用resistin基因mRNA编码区序列特异引物,从小鼠脂肪组织中,通过RT-PCR的方法合成resistin cDNA,T4DNA连接酶将resistin cDNA 于pGEM-T栽体,经双酶切及测序鉴定 成功后再亚 于pcDNA3.1(+)或pcDNA3.1(-)真核表达栽体,并测序鉴定.结 果 PCR产物长度与resistin cDNA理论长度363 bp相符:重组pGEM-T被EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ内切酶切为约3000 bp和355 bp两个片段,测序结果表明插入pGEM-T的DNA片段的核苷酸序列与小鼠resisdn基因mRNA编码区序列完全一致.重组pcDNA3.1(+) 和pcDNA3.1(-)测序结果表明插入的DNA片段分别与小鼠resistin基因mRNA编码区序列和反义resistin基因mRNA编码区核苷 酸序列一致.结论 成功 载有resistin基因和载有resistin基因反义核酸的重组真核表达质粒.

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 心血管疾病作为当今世界上患病率和死亡率 高的疾病,长期以来受到研究人员的广泛关注.而其中高血压是心血管疾病 重要的危险因素之一.许多临床试验显示,糖尿病患者较正常人群具有较高心血管疾病患病率.同时分子生物学研究也证实,Ⅱ型糖尿病和心血管疾病之间存在着密切的联系.抵抗素Resistin作为在胰岛素抵抗发生过程中的重要脂肪因子,被发现在高血压以及其他一些心血管疾病患者血清内具有较高的水平,成为研究糖尿病和心血管疾病之间相互关系的重要因子之一.近些年越来越多的研究表明,Resistin同炎症状态下的动脉粥样硬化,胰岛素抵抗状态下胰岛素调节血管舒张能力受损以及内皮细胞功能紊乱等等都有着密切的关系.但是关于Resistin同高血压之间的关系以及相关的分子机理的直接研究并不是很多.本实验利用小鼠无创血压仪对鼠尾血压进行测量证实Resistin连续处理6天可以引起小鼠体内高血压以及胰岛素抵抗.随后通过TLR4敲除模式小鼠,以及血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂培哚普利进行小鼠灌胃,利用RT-PCR,ELISA,ChIP等实验技术对Resistin诱导小鼠高血压的分子机理进行探索.同时结合正常人群,糖尿病,高血压以及糖尿病兼高血压患者的血清检验进一步探讨Resistin同糖尿病,高血压之间的关系.

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    背景及目的: 代谢综合征(Metabolic syndrome,Mets)的主要特点是胰岛素抵抗,高血压,中心型肥胖及高脂血症,其发病率逐年升高且发病年龄趋于年轻化;代谢综合征患者发生血栓栓塞性疾病及相关并发症的概率明显高于正常人群,但其具体发病机制尚未明确.代谢综合征患者体内抵抗素(Resistin,Re)水平明显升高.本课题组前期在体实验发现肥胖小鼠体内抵抗素水平升高,升高的抵抗素可促进小鼠静脉血栓的形成,同时肥胖小鼠体内纤溶酶原激活剂抑制物-1(Plasminogen activator inhibitor1,PAI-1)水平也升高.紧接着本课题组前期体外实验发现抵抗素能促进内皮细胞PAI-1表达水平的升高.因此,综合体内外实验,我们推测抵抗素促进血栓形成的过程可能与PAI-1有一定的关系.本研究通过PAI-1单 抗体(PAI-1Ab)抑制PAI-1蛋白活性,观察外源性抵抗素作用后血栓的变化情况,直接验证PAI-1在抵抗素促进小鼠静脉血栓形成中的作用. )抵抗素组小鼠下腔静脉PAI-1mRNA表达水平高于盐水组(P<0.01),抵抗素+PAI-1Ab组小鼠下腔静脉PAI-1mRNA表达水平高于盐水+PAI-1Ab组(P<0.01). (5)抵抗素组小鼠下腔静脉血栓内纤维蛋白含量明显多于盐水组,抵抗素+PAI-1Ab组小鼠下腔静脉血栓内纤维蛋白含量明显少于抵抗素组,盐水+PAI-1Ab组血栓纤维蛋白含量少于盐水组. 结论: 抵抗素可增加小鼠深静脉血栓重量及长度,促进血栓形成.抵抗素可升高小鼠下腔静脉内皮PAI-1mRNA及血浆PAI-1蛋白水平.抑制PAI-1可减弱抵抗素的促进深静脉血栓形成作用,提示抵抗素促进血栓形成部分是通过PAI-1发挥作用.

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