仑昌硕生物   小鼠羧酸酯酶（CarE）elisa试剂盒

       目的:利用野生型,血管紧张素转换酶2(ACE2)基因敲除型和转基因型小鼠探讨ACE2在重症急性炎(SAP)发展中的作用.方法:雨蛙素加脂多糖腹腔注射诱导C57BL/6小鼠SAP模型,分别于注射后2,12,24,48和72小时处死野生型SAP小鼠,ACE2基因敲除和转基因型SAP小鼠于造模后48小时处死,每组均设鼠龄匹配的正常对照组;生化方法测血清淀粉酶;HE染色观察病理学改变;免疫组织化学染色检测组织ACE2和ACE的表达部位;Western blot检测ACE2和ACE的蛋白表达量;ELISA检测血清组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-6(IL-6),IL-10,血管紧张素(1-7)(Ang (1-7))和Ang II.结果:(1)随SAP的小鼠组织炎细胞浸润和坏死明显增加,血清促炎因子TNF-α和IL-6升高,抗炎因子IL-10呈先增高后下降趋势;组织中ACE2,ACE,Ang (1-7),Ang II表达均上调,但ACE2与ACE的比值显著下降;(2)成模48小时,与同时间点野生型小鼠相比,ACE2基因敲除小鼠ACE2表达减少,ACE增加,ACE2/ACE比值进一步减少,病理变化和炎症反应进一步加重;ACE2转基因小鼠ACE2/ACE比值上调,病理变化和炎症反应均有所改善,死亡率降低.结论:ACE2在SAP中起着重要的负调控作用,增加ACE2表达可能能有效阻止SAP的

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       目的:探讨配对盒因子6(PAX6)在血管紧张素II(Ang II)诱导的成纤维细胞(CFs)转分化中的作用及其机制.方法:培养原代成年小鼠CFs,用Ang II(10-6 mol/L)建立CFs转分化模型,利用小鼠PAX6腺病毒载体感染小鼠CFs;实验分为Ad-GFP+Ctrl组(感染对照腺病毒),Ad-GFP+Ang II组(感染对照腺病毒再给予Ang II处理),Ad-PAX6+Ctrl组(感染过表达PAX6腺病毒)和Ad-PAX6+Ang II组(感染过表达PAX6腺病毒再给予Ang II处理).倒置荧光显微镜下观察CFs感染后荧光表达情况;采用Western blot检测CFs中PAX6,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),I型胶原(Col I),纤连蛋白(FN)和转化生长因子β1(TGFβ1)的表达;固定细胞免疫荧光技术检测α-SMA,Col I和FN的表达与分布;qPCR检测PAX6和TGFβ1的mRNA表达.结果:(1)倒置荧光显微镜下观察腺病毒载体感染CFs成功,qPCR和Western blot证明CFs中PAX6过表达成功(P<0.01);(2)在Ang II作用下,CFs中肌成纤维细胞标志物α-SMA显著升高,而过表达PAX6显著抑制Ang II诱导的α-SMA表达(P<0.01);(3)过表达PAX6显著抑制CFs中Ang II诱导的细胞外基质蛋白Col I和FN的表达与分泌(P<0.05);(4)在Ang II处理后,TGFβ1的mRNA和蛋白表达显著升高,而过表达PAX6显著抑制Ang II诱导的CFs中TGFβ1的mRNA和蛋白表达(P<0.05).结论:PAX6通过抑制TGFβ1的表达从而抑制Ang II诱导的CFs转分化及细胞外基质蛋白的表达与分泌.

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        目的 探索在较短时间内建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致小鼠心肌肥厚,心肌纤维化模型,为深入研究心力衰竭提供可靠的实验对象.方法 雄性C57BL/6J小鼠随机分为两组(AngⅡ组,对照组),AngⅡ组背部皮下手术置入预装AngⅡ微量泵,经微量泵持续释放AngⅡ1.6mg/(kgd)2周(AngⅡ负荷),对照组背部皮下手术置入预装蒸馏水微量泵2周.观察术前术后不同时间两组小鼠体重,尾动脉压等变化.放射免疫法测定术后2周两组血中脑钠肽(BNP)含量.超声心动图测定术前术后两组左室心肌厚度,左室腔大小,心功能等参数.观察术后2周两组心肌肥厚的变化.苏木素-伊红和Masson染色分别观察术后2周两组左室心肌细胞内径大小,心肌纤维化程度.结果 两组手术AngⅡ组术后3d血压开始上升,1,2周达到较高水平,明显高于对照组.AngⅡ负荷2周后BNP明显高于对照组.AngⅡ负荷2周后左室心肌厚度明显大于术前及对照组术后,左室射血分数(EF),左室短轴缩短率(FS)明显低于术前.AngⅡ负荷2周后心肌肥厚程度细胞横径,心肌纤维化程度[心肌血管周围胶原面积(PVF)/血管腔面积(VA)]均明显高于对照组.结论 通过置入微量泵体内缓慢释放血管紧张素Ⅱ可以较短时间内成功地模拟慢性压力负荷心肌肥厚,心肌纤维化模型,重复性好,为心力衰竭的深入研究提供了可靠的实验对象.

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