仑昌硕生物      小鼠FK506结合蛋白12-雷帕霉素相关蛋白（FRAP）elisa试剂盒

   目的:探讨受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)在小鼠附睾与精子的结合情况。方法:应用免疫荧光双标法检测RANTES在小鼠附睾中的细胞定位;用RT-PCR方法确定小鼠附睾精子是否表达RANTES;用流式细胞技术观察RANTES与附睾各段精子的结合情况;用免疫荧光方法显示RANTES及其特异性受体CCR1在小鼠附睾精子上的定位。结果:RANTES在小鼠附睾组织中主要表达于狭窄细胞和顶细胞;不表达于小鼠附睾精子,但能与小鼠附睾精子结合;其与精子结合比例在小鼠附睾的头部体部较少,尾部降至证实RANTES定位于精子的尾部中段,而受体CCR1定位于精子的头部。结论:RANTES可能在小鼠附睾头部参与了精子成熟过程的调节,RANTES特异性结合于精子尾部中段可能与精子运动相关;而RANTES与CCR1在小鼠附睾精子上的定位不一致,提示RANTES是通过CCR1以外的途径与精子结合。

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      目的 器官移植己成为许多脏器疾病终末期有效的治疗方法.目前全球器官移植数量越来越多,由于免疫或非免疫因素导致移植物功能丧失的患者也逐年增加,再次器官移植需求也逐年增加,如何提高再次移植术后移植物存活时间成为器官移植领域中的热点.本论文主要探讨趋化因子RANTES在过继CD4+Tm(memory T cell, Tm)引起再次移植急性排斥反应中表达量的变化及意义. 方法 从皮肤移植的小鼠中提取并纯化CD4+Tm输入受体小鼠体内,行同种异体移植,观察移植物生存时间,病理组织学的改变,移植物中趋化因子RANTES和效应性细胞因子(IL-2,IFN-γ)基因相对表达量及它们在受体血清中的浓度. 结果 1,皮肤移植预致敏小鼠中CD4+Tm可达26.83%; 2,对照组的平均存活时间为7.67±0.21天,实验组仅为5.17±0.17天(P<0.001); 3,对照组移植物排斥的平均评分为2.67±0.14级,而实验组达到3.92±0.08级(P<0.001); 4,实验组移植物中趋化因子RANTES的基因相对表达量明显增加,为对照组的2.6±0.21倍(P<0.001),IL-2和IFN-γ的表达量同样明显增加; 5,实验组血清中趋化因子RANTES浓度达到223.6±16.79pg/ml,较对照组120.7±9.47pg/ml显著增高(P<0.001),IFN-γ的浓度也显著增加. 结论 在过继转移CD4+Tm的记忆性移植模型中,CD4+Tm通过自身和(或)其它的途径导致了RANTES的表达和分泌量明显增加,大量的RANTES可招募Tm和其它的炎症细胞迁移到移植物,加速了实验组急性排斥反应的发生,明显缩短移植物的存活时间. 关键词:RANTES;记忆性CD4+T细胞;再次移植

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         目的 将携带人凝血因子IX(hFIX)基因(F9)的重组腺病毒转染C57BL/6小鼠脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cell,ADSC),经过传代培养后,观察F9是否在ADSC中稳定表达,探索ADSC是否可作为血友病基因治疗的载体细胞.方法 取C57BL/6小鼠腹股沟区脂肪,依据组织块悬浮法分离培养小鼠ADSC并进行传代培养,应用携带hFIX基因并含GFP荧光标记的重组腺病毒转染第3代ADSC,转染后再次进行传代培养至第4,5代细胞.荧光显微镜下观察细胞携带荧光数量,RT-PCR检测F9基因表达,ELISA法检测细胞上清液及Western Blot检测细胞内携带目的基因表达蛋白情况.结果 (1)重组腺病毒转染后荧光显微镜下可见荧光表达,细胞传代后仍具有荧光.(2)RT-PCR结果显示:四组ADSC均可表达内参GAPDH基因片段,A,B,C组可检测到目的基因F9的表达,D组未检测到F9的表达.(3)ELISA法检测凝血因子IX抗原(hFIX:Ag)结果显示:A组(81.62±8.82)ng/mL,B组(52.50±3.25)ng/mL,C组(47.41±4.00)ng/mL明显高于D组检测值(0.76±0.44)ng/mL,差异具有显著性(P<0.05).(4)Western Blot法检测四组细胞内hFIX蛋白表达情况,结果显示A组蛋白表达灰度值(0.68±0.10),B组(0.49±0.15),C组(0.18±0.05)明显高于D组蛋白表达灰度值(0.02±0.01),差异具有显著性(P<0.05).结论 重组腺病毒转染ADSC后,经过传代后培养,仍可表达较高的hFIX活性,可以作为血友病基因治疗的载体细胞.

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