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溶壁微球菌冻干细胞说明书
1 本品简介
本产品是用溶壁微球菌AS1.634经过发酵,培养8小时候,离心收集候,经过0.9%氯化钠溶液清洗6次后,经真空冻干而成。不含有任何保护剂,任何其他的成分。本品仅可用于溶菌酶活性测定的底物使用,不可再传代培养。
2 使用方法
2.1 供试品溶液的制备
取溶菌酶样品约25mg,精密称定,置25ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液[取磷酸二氢钠10. 4g与磷酸氢二钠7.86g及乙二二胺四乙酸二钠0.37g,加水溶解使成1000m1,调节pH值至6.2]适量使溶解,并稀释成每1ml中含溶菌酶50μg的溶液。
2.2 底物悬浮液的制备
称取本品15~ 20mg,加磷酸盐缓冲液(pH6. 2)0. 5~ 1ml,在研钵内研磨3分钟,再加磷酸盐缓冲液(pH6. 2)适量,使总体积约为50ml,使悬浮液于(25±0.1)℃时,在450nm的波长处测得的吸收度为0. 70±0.05 (临用前配制)。
2.3 检测
测定法精密量取(25±0.1)℃的底物悬浮液3ml,置1cm比色池中,在450nm的波长处测定吸收度,作为零秒的读数A0,然后精密量取(25±0.1)℃的供试品溶液0.15ml (相当于溶菌酶7.5μg),加到上述比色池中,迅速混匀,用秒表计时,至60秒时再测定吸收度A60;同时精密量取磷酸盐缓冲液(pH6. 2)0.15ml,同法操作,做为空白试验,测得零秒的读数A’0及60秒的读数A’60。
效价单位定义在室温 25°C、pH值6.2时,在波长450nm处,每分钟引起吸收度下降0.001为一个酶活力单位。按下式计算:
或者按照 GBT 30990-2014 溶菌酶活性检测方法 执行
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